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氣相液氮運輸罐短期儲存胚胎的可行性研究材料和方法(上)

時間:2019-05-21 13:31來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:
1.1動物
B10A、C57BL/6、DBA/2、B6D2,均由中科院上海實驗動物中心提供。雄鼠為8周齡、雌鼠為4周齡。另外胚胎移植受體使用lO周ICR雌鼠【SCXK(滬)2007.o005】。實驗嚴格遵守SPF級標準要求[SYXK(滬)2007.0005】。和平精英游戏模式怎么选择

1.2主要儀器
MⅦXC47/11一lO型液相和平精英游戏模式怎么选择,MⅥZ SC4/3V型氣相液氮運輸罐,Heraeus C02培養箱,NikonSMZ.10實體顯微鏡等。

1.3培養基的準備

[氣相液氮運輸罐短期儲存胚胎的可行性研究材料和方法(上)]
體外受精液:HTF(表1);胚胎冷凍液:DMsO(Si舀m D2650)DAP213(DMSO:A七etaITlide:P玎叩yleneglycol=2:1:3);石蠟油:(Sigma M8410)。在體外授精前1 d,準備好精子獲能和體外授精的培養液滴(200“1),上面覆蓋經胚胎測試過的石蠟油,放入37℃,5%Co:的培養箱里隔夜平衡。

1.4氣相液氮運輸罐的準備在使用前1 d先將液氮沖入氣相液氮運輸罐到罐體的一半,放置5 h,降低罐內溫度。然后再將液氮充滿,使液氮吸附劑充分吸附液氮,放置24 h后,將多余的液氮倒出后待用。

1.5體外授精
取4周齡的小鼠,在體外授精前3 d的20:oo,每只腹腔注射PMSG 5IU,48 h后,再每只腹腔注射hCG 5IU。注射hCG后約13 h處死小鼠,打開腹腔,迅速分離輸卵管,在濾紙上除去血跡后放入培養皿的石蠟油中,用解剖針挑破輸卵管膨大部,卵子自然流出,用解剖針將卵子團引入到隔夜平衡的200 m H1F受精液滴中。在雌鼠注射hCG約12 h后用頸椎脫臼的方法處死雄鼠,打開腹腔,迅速分離附睪尾和輸精管,盡可能除去黏附在附睪尾的脂肪和血跡。用手指捏住附睪尾,用眼科剪在其上部切開,用解剖針挑取精子放入隔夜平衡的200 ulHTF受精液滴里,培養1~1.5 h。將培養l h的精子懸浮液在顯微鏡‘卜.觀察活力和數量后,每個受精液滴加入10 L‘l獲能的精子。第二天早上洗卵,對2.細胞的胚胎進行計數。和平精英游戏模式怎么选择

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